堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒的使用技巧和操作規(guī)范要求

一、使用技巧與操作規(guī)范  

樣本處理與儲(chǔ)存  

血清/血漿需離心去除沉淀，組織樣本需勻漿后離心取上清，避免反復(fù)凍融（建議分裝凍存于-20℃或-80℃）。  

樣本采集后應(yīng)盡快處理，若需延遲檢測(cè)，可加入含抗生素的培養(yǎng)基防止污染，并避免含磷酸酶抑制劑（如EDTA、氟化物）。  

試劑準(zhǔn)備與平衡  

試劑盒從冷藏取出后，需室溫平衡15-30分鐘，確保溫度均勻。稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品不可保存，需現(xiàn)配現(xiàn)用。  

不同批號(hào)試劑不可混用，底物B（如TMB）需避光保存，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。  

加樣與操作細(xì)節(jié)  

使用校準(zhǔn)過的移液器，加樣時(shí)垂直懸空于孔上方，避免觸壁或產(chǎn)生氣泡。每步加樣后需震蕩混勻，確保反應(yīng)均勻。  

設(shè)立空白對(duì)照（無樣本）、陰性對(duì)照（已知陰性樣本）及陽性對(duì)照（已知陽性樣本），以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)有效性。  

溫育與顯色控制  

嚴(yán)格按照說明書設(shè)定溫育時(shí)間（如37℃避光30分鐘）和溫度，避免溫度波動(dòng)。顯色階段需嚴(yán)格避光，防止底物過早分解。  

終止反應(yīng)后需在10分鐘內(nèi)完成吸光度檢測(cè)（如450nm波長(zhǎng)），確保結(jié)果穩(wěn)定。  

洗滌與拍干技術(shù)  

每孔洗滌液需甩干，避免殘留影響結(jié)果。手工洗滌時(shí)，可用吸水紙輕拍孔壁，或使用自動(dòng)洗板機(jī)提高效率。  

避免將吸水紙直接插入孔內(nèi)，防止劃傷酶標(biāo)板表面，影響后續(xù)檢測(cè)。  

數(shù)據(jù)分析與結(jié)果判定  

通過標(biāo)準(zhǔn)品OD值建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，扣除空白對(duì)照后計(jì)算樣本濃度。若樣本經(jīng)過稀釋，需乘以稀釋倍數(shù)校正。  

結(jié)合臨床參考值范圍（如成人血清ALP正常值40-150U/L）進(jìn)行結(jié)果解讀，異常值需復(fù)測(cè)驗(yàn)證。  

二、堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒關(guān)鍵注意事項(xiàng)  

污染防控：全程穿戴防護(hù)裝備（手套、口罩、實(shí)驗(yàn)服），使用一次性吸頭，避免交叉污染。  

設(shè)備校準(zhǔn)：定期校準(zhǔn)移液器、酶標(biāo)儀，確保檢測(cè)精度。  

異常處理：若出現(xiàn)高背景值或假陽性，檢查洗滌是否干凈、試劑是否過期，或考慮樣本基質(zhì)干擾（如脂血樣本需離心去脂）。